净化车间沉降菌测试操作规程

1  目的

建立一个净化车间洁净区（室）沉降菌检测的标准操作程序，保证洁净区微生物检测按规范执行。

2  范围

公司所有洁净区（室）的沉降菌测定和环境的验证。

3  责任者

质量技术部对本SOP实施负责。

4  程序

4.1  本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区（室）的洁净度。

4.2  所用的仪器和设备

4.2.1  高压蒸汽灭菌器

使用时应严格按照“高压蒸汽灭菌器操作规程”和说明书操作。

4.2.2  恒温培养箱

必须定期对培养箱的温度计进行检定。

4.2.3  培养皿

采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。

4.2.4  培养基

4.2.4.1  普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。

4.2.4.2  培养基的准备及灭菌

4.2.4.2.1  将Φ90mm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。

4.2.4.2.2 将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

4.2.4.2.3  等琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养

48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。

4.3  测试步骤

4.3.1  采样方法

将已制备好的培养皿按5.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。

4.3.2  培养

4.3.2.1  全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

4.3.2.2  在36℃±1培养箱中培养，时间不少于48h。

4.3.2.3  每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

4.3.3  菌落计数

4.3.3.1  用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.3.3.2  若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

5 注意事项

5.1  测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

5.2  采取一切措施防止人为对样本的污染。

5.3  对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

5.4  由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5.5  采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

6  测试规则

6.1  测试状态

6.1.1  沉降菌测试前，被测试洁净区（室）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

6.1.2  沉降菌测试前，被测试洁净区（室）已经过消毒。

6.1.3  测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

6.2  测试人员

6.2.1  测试人同必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

6.2.2  静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

6.3  测试时间

6.3.1  对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

6.3.2  对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

6.4  沉降菌计数

6.4.1  采样点数目及其布置

6.4.1.1  最少采样点数目

沉降法的最少采样点数可按表1确定。

6.4.1.2  采样点的布置

6.4.1.2.1  工作区采样点的位置离地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。

6.4.1.2.2  可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

6.4.1.2.3  采样点位置的详细规则见附图。

6.5  记录

测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。

测试报告的编写见附表。

6.6  结果

6.6.1  用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

6.6.2平均菌落数的计算，见下式。

式中：M为平均菌落数

M1为1号培养皿菌落数

M2为2号培养皿菌落数

Mn为n号培养皿菌落数

n为培养皿总数。

6.7  结果评定

用平均菌落数判断洁净区（室）空气中的微生物。100,000级洁净区沉降菌(个／m2)应小于等于l0个；10000级洁净区沉降菌(个／m2)应小于等于3个；100级洁净区沉降菌(个／m2)应小于等于1个。

6.7.1  洁净区(室)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

6.7.2  若某洁净区（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

沉降菌测试记录